RUS
ENG
RUS
ENG
Мобильное
приложение
Обратная
связь
+7 (495) 745-05-51

Эффективность получения сексированных эмбрионов КРС методом in vitro

18.10.2017: Как это осуществляется в "Бетагран - Липецк".


Дмитрий Машталер
старший эмбриолог ООО "Бетагран- Липецк"

В течении последнего времени в России уделяется существенное внимание вопросам в области воспроизводства стада и повышения уровня племенных качеств животных, так как это является краеугольным камнем в отечественном животноводстве. Однако успешное решение данных вопросов невозможно без использования современных методов и технологий, которые уже давно нашли свое применение в странах Запада.

Получение эмбрионов крупного рогатого скота методом in vitro - современный и прогрессивный биотехнологический метод, позволяющий значительно ускорить процесс воспроизводства высокопродуктивных животных. Данный метод состоит из нескольких этапов: извлечение ооцитов из антральных фолликулов яичника (OPU), созревания ооцитов (IVM - in vitro maturation); оплодотворения (IVF - in vitro fertilization) и эмбриональной культуры (IVC - in vitro culture). Важным аспектом данной технологии является то, что получать яйцеклетки от животных доноров можно как прижизненно, используя метод трансвагинальной аспирации, так и от убойного материала (яичники коров с мясокомбината). Получение разделённых по полу эмбрионов - востребованный и перспективный метод, который заключается в оплодотворении яйцеклеток сексированной спермой быков. Оплодотворение яйцеклеток разделённой по полу спермой в отличие от обычной даёт возможность получать особей желательного пола с вероятностью до 93 %. Помимо возможностей в области селекции данный метод имеет и ряд экономических преимуществ, а именно: при пересадке эмбрионов, не разделённых по полу, частота рождения бычков составляет до 55%. Что имеет немаловажное значение в молочном скотоводстве, где есть большая потребность в ремонтных тёлочках с высокой молочной продуктивностью.

Исходя из этого перед коллективом лаборатории ООО «Бетагран- Липецк» была поставлена задача направленная на создание оптимального протокола оплодотворения и культивирования доимплантированных эмбрионов in vitro. Для этого ооциткумулюсные комплексы получали прижизненно из антарльных фолликулов диаметром 2-6 мм от коров доноров методом TAU (транс вагинальной аспирации. После чего ооциткумулюсные комплексы помещались в среду дюльбекко с добавлением с 5% эстральной сыворотки, 4% р-ра гентамицина и р-ра. гепарина. Поиск и морфологическую оценку осуществляли на стереомикроскопе лабораторного класса, Olympus SZ51 при 200 кратном увеличении. Для экспериментов отбирали ооциты средней величины с мелкозернистой ооплазмой, окруженные компактным многослойным кумулюсом. Для дозревания ооцитов использовали среду 199 (Medium 199, Hepes modification, 25mM.) с добавлением 10% эстральной сыворотки крови крупного рогатого скота, Na-пирувата, BSA, 1.0 ЕД / мл лютенизирующего гормона, 10 ME/мл, фолликулостимулирующего гормона, 1,0мкг / мл эстрадиола (спиртовой раствор) и 50 мкг / мл гентамицина.

Ооциты помещали в лунки планшетов в среду созревания в объёмом 500 мкл под минеральным маслом ("Sigma", США) и культивировали в течение 20-24 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере 5 % CO2 в воздухе. Для оплодотворения использовали разделённое по полу криоконсервированное семя быков в пайэтах объёмом 0,25 мл из расчёта 1 доза на 30 яйцеклеток. Оттаивание производили при температуре + 37 º С в течении 40 секунд. По той же схеме оттаивалось и обычное семя быков. Получение подвижной фракции сперматозоидов проводили путём центрифугирования в градиенте плотности (р-р перколла) при оборотах ротора центрифуги 300G. Выход подвижных сперматозоидов при центрифугировании в градиенте плотности был больше, чем при использовании метода флотации (Swim Up). Для оплодотворения яйцеклетки перемещались в лунки со средой Fert-TALP объёмом 80 мкл. И инкубировались совместно со сперматозоидами в течении 18-20 часов при температуре 38,5-39 в атмосфере с содержанием 5 % CO2.

После оплодотворения зиготы отмывали в растворе SOF и механически удаляли клетки кумулюса посредством пепетирования при помощи наконечников для денудации ооцитов диаметром 135 мкм. Очищенные зиготы помещались в среду на основе SOF c добавлением BSA, MEM vitamins, MEM Niaa, MEM iaa в лунки планшетов объёмом 500 мкл, покрытые минеральным маслом ( Sigma ,США) и культивировали при температуре 38,5º С в увлажненной атмосфере под газовой фазой (по 5% CO2 и O 2 и 90 % N2) в течение 7-8 суток. Количество оплодотворённых зигот подсчитывали через 48 и 62 часа после оплодотворения.

Для определения эффективности оплодотворения сексированной спермы использовалось заморожено-оттаянное семя пяти быков. Было оплодотворено 1050 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 944 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 89,93%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 29,42%

Таблица 1 Оплодотворяемость и выход эмбрионов сексированное семя

№п/п

Бык

∑ опл. окк

∑ дроб.

% от дроб

Выход бластоцист

% от опл.

% от дроб.

1

Маузер

346

321

93,00%

94

29,28%

27,16%

2

Мосби

358

322

90,60%

96

29,81%

26,81%

3

Коди

121

107

88,45%

50

46,72,%

41,32%

4

Бигшот

92

88

90,88%

32

36,36%

34,78%

5

Инспект

117

106

91,55%

37

34,90%

34,90%

итого

1050

944

89,93%

309

32,73%

29,42%

Во втором случае использовалось обычное заморожено-оттаянное семя от четырёх быков. Было оплодотворено 770 яйцеклеток, полученных методом OPU. Из них у 708 началось дробление, средний процент дробящихся яйцеклеток составил 91,94%. Выход доимплонтированных бластоцист от числа поставленных на созревание яйцеклеток составил 35,58%.

Таблица 2 Оплодотворяемость и выход эмбрионов обычное семя

№п/п

Вид семени

∑ опл. окк

∑ дроб

% от дроб

Выход бластоцист

% от опл.

% от дроб

1

Обычное

770

708

91,94%

274

38,70%

35,58%

2

сексированное

1050

944

89,93%

309

32,73%

29,42%


Таким образом сравнивая вышеперечисленные данные, можно сделать вывод, что оплодотворяющая способность сексированного и традиционного семени не имеет значительных расхождений.


Таблица 3 Сравнительная характеристика и эффективность использования сексированного и традиционного семени при производстве эмбрионов in vitro.


Так разница составила 2,01% в пользу обычного семени. Выход эмбрионов был больше на 6,16 в пользу обычного семени. Несмотря на то, что культивирование эмбрионов производилось на одной культуральной системе, количество полученных эмбрионов in vitro было выше в группе, где использовалось обычное семя. Мы предполагаем, что это связанно с окрашиванием сперматозоидов флуоресцентной краской, из-за чего снижается энергетический запас, что и может обуславливать меньший жизненный потенциал гамет по сравнению с обычным семенем, как следствие - остановку развития некоторых эмбрионов.

Таким образом, наши данные свидетельствуют о том, что разработанный протокол оплодотворения и культуральная система обладает высоким потенциалом и позволяет получать в массовом количестве разделённые по полу эмбрионы по технологии in vitro. А также может использоваться для получения зигот и предимплантационных эмбрионов КРС in vitro для различных биотехнологических программ.

Статья взята с сайта © DairyNews.ru http://www.dairynews.ru/news/effektivnost-polucheniya-seksirovannykh-embrionov-.html

18.10.2017 0
29.03.2024
В Уфе обсудили новые реалии развития АПК и способы повышения рентабельности

С 26 по 29 марта в столице Республики Башкортостан Уфе проходили агропромышленный форум и 34-я международная выставка «Агрокомплекс». Активное участие в этих мероприятиях приняло Уфимское представительство «Щёлково Агрохим». Особым гостем агрофорума стал гендиректор компании Салис Каракотов, который рассказал участникам о современных продуктах и технологиях «Щёлково Агрохим», направленных на повышение рентабельности растениеводства.

photo_2024-03-26_17-00-56.jpg
На пленарном заседании Салис Каракотов вновь обратил внимание на возможности российской селекции

В первый день работы выставки на пленарном совещании агрофорума обсуждали ключевые изменения в АПК на фоне текущей трансформации отрасли. Модерировал дискуссию глава Торгово-экономического представительства провинции Цзянсу Китайской Народной Республики в Российской Федерации Цзя ИньКэ, открыл совещание министр сельского хозяйства республики Ильшат Фазрахманов. С приветственным словом к участникам обратились зампредседателя ГД РФ по защите конкуренции Алексей Ситников, руководитель ФГБУ «Агроэкспорт» Дмитрий Краснов, гендиректор «Щёлково Агрохим», академик РАН, д. х. н. Салис Каракотов.

«Российское АПК сегодня находится в новых реалиях, которые вынуждают нас взять курс на импортозамещение и экспорт. Страну мы уже накормили, и, чтобы отрасль не буксовала, мы должны развиваться в экспортном направлении. Это касается не только сельхозпродукции, но и средств защиты растений, например. Кроме того, уже взят курс на квотирование ввоза семян, СЗР, на самообеспечение сельхозтехникой – всё это необходимо для стабилизации экономики АПК», - подчеркнул Салис Каракотов.

К экспорту СЗР сегодня реально добавить и экспорт семенного материала, считает гендиректор «Щёлково Агрохим». Так, компания уже поставляет семена сахарной свёклы, сои, подсолнечника, озимой пшеницы в Египет. Также идут поставки семян в Узбекистан, Туркменистан, Беларусь.

«Регионам, где есть селекция засухоустойчивых сортов, сегодня можно развивать торговые связи с Африкой. В Башкортостане надо активно заниматься подсолнечником, сахарной свёклой, льном, а также озимой пшеницей засухоустойчивых сортов с высоким качеством зерна, которая будет востребована на экспорт. Мы тоже хотим демонстрировать в республике возможности российской селекции – организовать размножение и селекционную работу на этой территории», - заверил Салис Каракотов.

photo_2024-03-26_16-19-03.jpg
Подписание соглашения о сотрудничестве между «Щёлково Агрохим» и региональным минсельхозом

В подтверждение его слов в первый день работы агрофорума состоялось подписание соглашения «Щёлково Агрохим» с министерством сельского хозяйства Республики Башкортостан о сотрудничестве и взаимодействии сторон в целях реализации на территории республики современных технологий возделывания сельхозкультур.

Соглашение определяет основные задачи по развитию селекционно-семеноводческой деятельности, обучению специалистов в сфере селекции, отбора конкурентоспособных селекционных достижений, а также по развитию животноводческого сектора путём получения эмбрионов КРС «in vivo» и «in vitro» с участием селекцентра «Бетагран Липецк».

Тему рентабельности растениеводства продолжили обсуждать во второй день форума на секции «Синергия производства и науки в области растениеводства», которую организовал республиканский минсельхоз. Модератор дискуссии, заместитель министра сельского хозяйства Республики Башкортостан Ирик Сураков подчеркнул, что современное агропредприятие должно обязательно внедрять достижения науки, чтобы быть экономически успешным. О возможностях российской селекции, о рентабельности сельхозкультур и способах её повышения через систему управления вегетацией рассказали эксперты «Щёлково Агрохим».

Первое слово предоставили Салису Каракотову. Гендиректор «Щёлково Агрохим» обратил внимание участников дискуссии на программу импортозамещения в области семеноводства и на объёмы квот на ввоз иностранных семян, которые начали действовать с текущего года. Определённые трудности с поставками семян аграрии уже начали испытывать, особенно это заметно по таким импорточувствительным культурам, как сахарная свёкла.

Между тем, подчеркнул Салис Каракотов, компания уже 14 лет занимается селекцией сахарной свёклы на базе первого в стране частного селекцентра «СоюзСемСвёкла». В наличии имеется достаточное количество собственных чистых линий, выведено 27 гибридов. Широкие демонстрационные испытания, а также производственные посевы в ГК «Русагро» доказали, что «щёлковские» гибриды догоняют по урожайности и другим важным показателям (выравненность, дигестия и пр.) лучшие образцы иностранной селекции.

«Надо понимать, что мы сравнивали наши гибриды с гибридами зарубежных компаний, некоторые из них присутствуют на селекционном рынке около ста лет. И то, что мы за 14 лет догнали их, уже огромный результат», - отметил Салис Каракотов. Он добавил, что сегодня «щёлковские» гибриды демонстрируют высокую урожайность в производстве (Бриз – 712 ц/га, Прилив – 637 ц/га) и могут стать реальной альтернативой зарубежным. Кроме того, гибриды «СоюзСемСвёкла» второй сезон активно закупают в Египте. Там российский гибрид Вулкан показал среднюю урожайность 134,5 т/га! «Опыт Египта показывает, что мы идём в верном направлении», - считает Салис Каракотов.

«Сегодня башкирские свекловоды обеспечены семенами на 56%. Призываем активно подавать заявки на посевной материал в представительство «Щёлково Агрохим», - добавил Ирик Сураков

Салис Каракотов подчеркнул: возможности российской селекции сегодня очень велики, и это наглядно демонстрирует опыт «Щёлково Агрохим». Компания владеет свыше 230 тыс. га земли в Центральном, Поволжском и Южном федеральных округах. Рентабельность культур докладчик рассмотрел на примере хозяйств Центрально-Чернозёмного района. Так, по озимой пшенице этот показатель составляет 51,2%, по сое – 59%, по подсолнечнику – 59%, по сахарной свёкле – 114%. Добавим, что почти 100% посевного материала, используемого в хозяйствах, – отечественной и «щёлковской» селекции.

«Цены на российские семена чувствительно ниже, чем на импортные. Например, по подсолнечнику они могут отличаться в 2,5 раза, по сахарной свёкле – на 20-25% и так далее. В нашем российском ассортименте сегодня колоссальный скачок предложения отечественных семян, и «Щёлково Агрохим» предлагает сорта и гибриды озимой пшеницы, сои, рапса, подсолнечника, кукурузы, сахарной свёклы, которые прошли апробацию в наших хозяйствах и доказали эффективность», - сообщил генеральный директор компании.

photo_2024-03-26_17-00-58.jpg

На стенде Уфимского представительства помимо средств защиты и листового питания растений демонстрировали образцы семян основных сельхозкультур. В центре – Андрей Назаров, премьер-министр Правительства Республики Башкортостан

Помимо выбора отечественного посевного материала, гендиректор «Щёлково Агрохим» также порекомендовал аграриям уделять внимание новым подходам в технологии выращивания сельхозкультур. В частности, использовать приёмы управления вегетацией – применять листовое питание и биопрепараты для повышения супрессивности почвы. Подробнее об этом аудитории рассказал замглавы Уфимского представительства, д. с.-х. н. Радик Гайфуллин. Он призвал аграриев шире применять опыт представительства по работе с бинарными посевами и сидератами, а также использовать по вегетации микроудобрения, в том числе УЛЬТРАМАГ ФОСФОР СУПЕР, УЛЬТРАМАГ СУПЕР СЕРА-900, УЛЬТРАМАГ СУПЕР ЦИНК-700, и стимулировать почвенную биоту осенним внесением препарата на основе полезных бактерий БИОКОМПОЗИТ-ДЕСТРУКТ.

«Применение хозяйствами приёмов по управлению вегетацией через листовое питание набирает обороты. В прошлом году «Щёлково Агрохим» реализовало листовых подкормок на площадь 5,5 млн га. Динамика роста продаж этих препаратов опережает динамику по СЗР, это значит, что аграрии видят результат от их применения и находят новые способы улучшить экономику своих хозяйств, в том числе через экономию на основном питании», - резюмировал Салис Каракотов.

диплом.jpg
По итогам выставки Уфимское представительство было отмечено Дипломом I степени за научные разработки в растениеводстве. Награду консультанты представительства получили за внедрение в производство широкорядных посевов сельхозкультур.


Показать ещё